Sakar 81379 Instrukcja Użytkownika

(19) Europäisches Patentamt European Patent Office Office europeen des brevets (11) EP 0 662 143 B1 (12) EUROPAISCHE PATENTSCHRIFT (45)

EP 0 662 143 B1 Mutation den Bereich von Nukleotidposition 11 bis 120 in der unter der AC-Nummer V00372 in der EMBL-Date

EP 0 662 143 B1 5' 3' C ATT CGC GCC CGT CTG CTG TAA TA s CTAGG TAA GCG CGG GCA GAC GAC ATT ATT CGA SEQ ID

EP 0 662 143 B1 Beispiel 3: Konstruktion eines chromosomal kodierten, feedbackresistenten serA5-Allels mit Hilfe eines rekombinante

EP 0 662 143 B1 kulturen in 100 ml SM1 -Medium überführt. Das SM1-Medium enthielt 5 g/l Glucose, 3 g/l KH2P04, 12 g/

EP 0 662 143 B1 (iii) ANZAHL DER SEQUENZEN: 14 (iv) COMPUTER-LESBARE FORM: 5 (A) DATENTRÄGER: Floppy disk (B) COMPUTER: IBM

EP 0 662 143 B1 (iii) HYPOTHETISCH: JA (v) ART DES FRAGMENTS: C-Terminus (vi) URSPRÜNLICHE HERKUNFT: (A) ORGANISMUS: Escherichi

EP 0 662 143 B1 Ala Glu Gin Gly Val Cys Ser Arg Ala Asn Ile Ala Ala Gin Tyr Leu 15 10 15 Gin Thr Ser Ala Gin Met

EP 0 662 143 B1 (D) TOPOLOGIE: linear (ii) ART DES MOLEKÜLS: Protein (iii) HYPOTHETISCH: JA (v) ART DES FRAGMENTS: C-Terminu

EP 0 662 143 B1 (i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA: (A) LÄNGE: 32 Aminosäuren (B) ART: Aminosäure (C) STRANGFORM: Einzel (D) TOPOLOGIE:

EP 0 662 143 B1 (i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA: (A) LÄNGE: 32 Aminosäuren (B) ART: Aminosäure (C) STRANGFORM: Einzel (D) TOPOLOGIE:

EP 0 662 143 B1 Beschreibung Die Erfindung betrifft Mikroorganismen für die Produktion von Tryptophan und Verfahren zu ihrer H

EP 0 662 143 B1 (A) LÄNGE: 32 Basenpaare (B) ART: Nukleinsäure (C) STRANGFORM: beides (D) TOPOLOGIE: linear 5 (ii) ART DES MOL

EP 0 662 143 B1 (iii) ANTISENSE: NEIN (vi) URSPRÜNLICHE HERKUNFT: 5 (A) ORGANISMUS: Escherichia coli (B) STAMM: B (ix) MERKMALE:

EP 0 662 143 B1 20 25 30 ACC AAC ATC GAA TTT CAC AAA GGC GCG CTG GAT GAT GAA CAA TTA AAA 144 Thr Asn Ile Glu Phe

EP 0 662 143 B1 3AA GCC AAT GCT AAA GCG CAC CGT GGC GTG TGG AAC AAA CTG GCG GCG 432 31u Ala Asn Ala Lys Ala His Arg

EP 0 662 143 B1 GGC CTG GAA GTT GCG GGT AAA TTG ATC AAG TAT TCT GAC AAT GGC TCA 960 Gly Leu Glu Val Ala Gly Lys Leu

EP 0 662 143 B1 Met Ala Lys Val Ser Leu Glu Lys Asp Lys Ile Lys Phe Leu Leu Val 15 10 15 Glu Gly Val His Gin Lys

EP 0 662 143 B1 85 90 95 Arg Gly Ile Pro Val Phe Asn Ala Pro Phe Ser Asn Thr Arg Ser Val 100 105 no Ala Glu Leu Val

EP 0 662 143 B1 Tyr Leu Gin Thr Ser Ala Gin Met Gly Tyr Val Val Ile Asp Ile Glu 370 375 380 Ala Asp Glu Asp Val Ala G

EP 0 662 143 B1 8. Process according to Claim 7, characterised in that the serA allele is introduced into the chromo

= 3 _l e o E | | •2 -7** J a> o o -e s s- 5; ^ o n_

EP 0 662 143 B1 kannt und auf alle Mikroorganismen anwendbar sind, sind erfindungsgemäße Stämme aus beliebigen Mikroorganis-

f • -31 — \ \ \ s s V s «I I - X

EP 0 662 143 B1 10 30 50 ATGGCAAAGGTATCGCTGGAGAAAGACAAGATTAAGTTTCTGCTGGTAGAAGGCGTGCAC MetAlaLysValSerLeuGluLysAspLysIleLysPheLeuLeuValGluGly

EP 0 662 143 B1 430 450 4/U \AACTGGCGGCGGGTTCTTTTGAAGCGCGCGGCAAAAAGCTGGGTATCATCGGCTACGGT LysLeuAlaAlaGlySerPheGluAlaArgGlyLysLysLeuGlyllelle

EP 0 662 143 B1 850 870 890 2TGTGTGAATTCGACAACGTCCTTCTGACGCCACACATTGGCGGTTCGACTCAGGAAGCG LeuCysGluPheAspAsnValLeuLeuThrProHisIleGlyGlySerThr

EP 0 662 143 B1 34

EP 0 662 143 B1 35

EP 0 662 143 B1 3000 36

EP 0 662 143 B1 5800 m Hind III /PvuII Kpnl ^Xbal / Hindll^ 5000 hOOO "2000 Sal I/PvuII 3000 5800 i Sphl/Pvull 5000 -H 1000 J*Pn

EP 0 662 143 B1 12000 12UJ0 10000 8000 2000 Mindlll/Smal \ TCpn I Hindll looo 6000 Sall/Smal 13m00 10000 I 6000 Sall/Smal W-Sphl/Smal ^Kpn

EP 0 662 143 B1 eine defekte Tryptophanase. Diese Eigenschaften lassen sich im erfindungsgemäßen Stamm am einfachsten durch di

EP 0 662 143 B1 J. Bact. 100, 3: 972-982, beschrieben. Allele, die für eine Serin-insensitive Phosphoglyceratdehydrogenase kodi

H l-i H M }-\ Fh c_, cl, Ch

EP 0 662 143 B1 mit einem Ki-Wert zwischen 100 uJvl und 50 mM Serin. Zur Expression der PGD-Proteine im erfindungsgem

EP 0 662 143 B1 125-129). Ca. 2 x 109 Zellen von YMC9 aus der exponentiellen Wachstumsphase einer in LB gewachsenen Kultur

EP 0 662 143 B1 5 10 \o r- oo o> o r-l •• O O O O O 55 55 55 55 55 Q Q Q Q Q hi H H M M a a o> <y